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技術(shù)文章
細胞尺寸在生物研究中至關(guān)重要。越來越多研究揭示了細胞大小和表型特征（如干性特征、增殖能力和代謝狀態(tài)）之間復(fù)雜的相關(guān)性。在生物制造等應(yīng)用的工藝流程中，細胞大小是評估細胞治療中分批培養(yǎng)或原材料細胞是否健康的關(guān)鍵指標(biāo)。因此，自動細胞計數(shù)中可靠的細胞大小測定已成為重要的結(jié)果。
LUNA-FX7細胞計數(shù)儀可精確提供細胞大小的數(shù)據(jù)。除了所有LUNA系列細胞計數(shù)儀共有的標(biāo)準(zhǔn)細胞尺寸門控功能外，LUNA-FX7計數(shù)輸出還包括與每個細胞活力狀態(tài)結(jié)合的尺寸測定。此外，LUNA-FX7具有多種方法來根據(jù)計數(shù)期間和計數(shù)后的大小對細胞群進行分析和分類。在此，我們展示了LUNA-FX7在測量細胞尺寸上的準(zhǔn)確性和可靠性及其精確的尺寸門控功能。為了評估確定細胞大小的準(zhǔn)確性，在明場總細胞計數(shù)模式下對六種不同的NIST可追蹤粒度標(biāo)準(zhǔn)品和兩種細胞系A(chǔ)sPC-1(胰腺癌)和DLD-1(結(jié)腸癌)進行了計數(shù)。
六種不同的NIST可追蹤粒徑標(biāo)準(zhǔn)品(10-46 μm)在LUNA-FX7的明場總細胞計數(shù)模式下進行計數(shù)。測定粒徑的準(zhǔn)確度為96.7%以上。相反，市面上大多細胞計數(shù)儀對于10 μm或更小和50 μm及更大的顆粒則不準(zhǔn)確。
NIST可追蹤粒度標(biāo)準(zhǔn)的尺寸測定。(A-F)圖像顯示了標(biāo)記良好的顆粒，表明顆粒直徑尺寸的精確測量。(G)該表顯示了LUNA-FX7™和競爭對手計數(shù)器的測量顆粒尺寸和尺寸測量精度。
精確的尺寸測定。(A) 圖像顯示了標(biāo)記良好的各種尺寸的顆粒。(B-C)直方圖指示NIST顆粒按尺寸的準(zhǔn)確分布。
為了評估LUNA-FX7中尺寸測量的精確性，我們準(zhǔn)備了四種不同比例的NIST可追蹤粒徑標(biāo)準(zhǔn)品（~10 μm、20 μm、40 μm和60 μm）的混合物。最初，我們對最小細胞尺寸值為3 μm和最大細胞尺寸值為60 μm的混合顆粒進行計數(shù)，該值是根據(jù)默認(rèn)協(xié)議進行修改的。計數(shù)后，生成細胞濃度與細胞大小的直方圖，并且NIST標(biāo)準(zhǔn)已正確分類。
執(zhí)行選定的尺寸門控，生成適合目標(biāo)尺寸的標(biāo)簽，尺寸測量的準(zhǔn)確度超過96.2%。此外，尺寸門控可以輕松應(yīng)用于LUNA-FX7，通過計數(shù)前預(yù)設(shè)的協(xié)議，通過計數(shù)后立即調(diào)整直方圖，或利用具有不同大小參數(shù)的協(xié)議重新分析存儲的計數(shù)數(shù)據(jù)。
LUNA-FX7™中特定尺寸的門控。標(biāo)記的圖像和直方圖顯示，目標(biāo)尺寸的顆粒（以橙色表示）通過門控進行了集中、選擇性和排他性的檢測。
最后，我們計數(shù)了兩種不同大小范圍的細胞系：AsPC-1（胰腺癌）和DLD-1（結(jié)腸癌）。健康的AsPC-1 細胞的尺寸范圍為8 - 40 µm，而健康的DLD-1細胞的尺寸范圍預(yù)計較窄，為10 - 20 µm。LUNA-FX7™ 準(zhǔn)確捕獲兩個種群的整個大小范圍。
AsPC-1和DLD-1細胞的細胞計數(shù)和大小測定。應(yīng)用AsPC-1 (A-C)和DLD-1 (D-F)細胞系來確認(rèn)不同尺寸混合的計數(shù)性能。
結(jié)論
LUNA-FX7™有多種方法來測量、區(qū)分和確定細胞群的大小。LUNA-FX7™具有計數(shù)期間和計數(shù)后預(yù)定義大小門控選項，可靈活評估細胞群的健康狀況和質(zhì)量。此外，LUNA-FX7™的再分析功能可以對下游分析中保存的珍貴計數(shù)進行更廣泛的評估。
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