結(jié)核桿菌培養(yǎng)基的制備過(guò)程

結(jié)核分枝桿菌，1882年由德國(guó)細(xì)菌學(xué)家Koch（Robert Koch，1843-1910）發(fā)現(xiàn)并證明為人類(lèi)結(jié)核病的病原菌，該菌可侵犯全身各器官，其中引起的肺部疾病最為多見(jiàn)，是嚴(yán)重影響人類(lèi)生命健康的傳染病之一，成為了全球尤其是發(fā)展中國(guó)家最為嚴(yán)重的全球性衛(wèi)生問(wèn)題。對(duì)于結(jié)核桿菌的研究，仍是研究人員重點(diǎn)研究?jī)?nèi)容之一，研究人員往往需要較多的樣本量基礎(chǔ)，相關(guān)培養(yǎng)基的批量制備和儲(chǔ)存就尤為重要了。

結(jié)核桿菌常用的培養(yǎng)基是羅氏培養(yǎng)基，全稱(chēng)為羅-琴（Lowenstein-Jensen）培養(yǎng)基。

羅氏培養(yǎng)基的主要組成成分及參考量如下：

磷酸二氫鉀2.4g；一水硫酸鎂0.24g；拘掾酸鎂0.6g；天門(mén)冬素3.6g；馬鈴薯淀粉30g；2％孔雀綠水溶液20ml；蒸餾水600ml；甘油12ml；新鮮雞蛋液1000ml

羅氏培養(yǎng)基的制備方法及步驟：

1、       在無(wú)菌區(qū)間內(nèi)，將上述材料中的磷酸二氫鉀、硫酸鎂、拘掾酸鎂、天門(mén)冬素和甘油溶解與蒸餾水中并加熱

2、       在加熱的同時(shí)加入馬鈴薯淀粉并不斷攪拌，在沸水中水熱1小時(shí)，再置于56度水浴鍋中水浴1小時(shí)；

3、       用肥皂水清洗雞蛋，之后用70%的酒精擦洗，晾干；

4、       無(wú)菌條件下打破蛋殼，將蛋白蛋黃裝入滅菌容器中，充分?jǐn)嚢杌靹?，之后用無(wú)菌紗布進(jìn)行過(guò)濾，得到新鮮雞蛋液；

5、       將雞蛋液加入到一開(kāi)始準(zhǔn)備的混合液中，并加入滅菌的2％孔雀綠水溶液，均勻混合，避免氣泡；

6、       將混合好的溶液分裝到滅菌的試管內(nèi)并封閉，每支試管液量在6-8ml左右；

7、       將試管放在架子上并保持一定斜度，然后放在蒸汽濃縮器（例如點(diǎn)成TBT-T100IN結(jié)核菌培養(yǎng)基制備儀）中，在85℃的水浴中靜置50分鐘來(lái)濃縮培養(yǎng)基；

8、       之后取出并放置于4℃冰箱中低溫保存?zhèn)溆茫?/span>

9、       使用時(shí)取出并恢復(fù)到室溫，檢查培養(yǎng)基是否污染即可，一般建議一個(gè)月內(nèi)使用。

在制備羅氏培養(yǎng)基的過(guò)程中，需要用到一些必要的儀器，如用于消殺病毒細(xì)菌的滅菌器、用于恒溫控制的水浴鍋、還有專(zhuān)門(mén)用于批量濃縮凝固培養(yǎng)基的蒸汽濃縮器等，點(diǎn)成均可提供以上設(shè)備，還可以提供無(wú)菌環(huán)境的超凈工作臺(tái)，滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)需求。

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